卡介苗（Bacillus Calmette-Guérin，BCG）是目前唯一获得临床许可的结核病疫苗，自1921年首次用于人类以来，已在全球范围内广泛用于预防结核病。在上个世纪，人们发现BCG除了可以预防结核病外，还能提供对癌症、自身免疫疾病和其他传染病的非特异性保护作用。近年的研究发现BCG可以通过重新编程先天免疫细胞（例如巨噬细胞）的代谢和表观遗传修饰，增强它们对二次刺激的反应，这种现象被称为“训练性免疫”。训练性免疫被认为是BCG诱导非特异性保护的机制之一。巨噬细胞作为研究训练性免疫最常用的细胞模型，但人原代巨噬细胞的难获得特性限制了其相关研究，且BCG准确定量也存在难点。
2024年8月17日，上海市重大传染病和生物安全研究院范小勇/上海市公共卫生临床中心胡志东研究组在Cell子刊STAR Protocols杂志在线发表了题为“Protocol for analyzing BCG-induced trained immunity in murine bone marrow-derived macrophages”的实验方案文章(Protocol)。在此之前，范小勇课题组已经围绕训练性免疫在Science Advances、Medcomm和BMC Microbiology上发表多项研究成果。
在本研究中，研究者详细阐述了BCG诱导小鼠骨髓来源的巨噬细胞（Bone marrow-derived macrophages，BMDM）产生训练性免疫的实验流程，包括BCG增菌培养、BCG单细菌悬液制备条件的优化、BMDM细胞诱导、BCG训练BMDM细胞及细胞因子检测（图1）。除了详细的试剂和方法，本方案也提供了详细的BCG单细菌制备方案和BMDM细胞诱导方法，因而可广泛应用于诸如分枝杆菌等细菌和巨噬细胞相关的感染免疫研究。
复旦大学2019级直博生徐进川同学为本文第一作者。上海市重大传染病与生物安全研究院/上海市公共卫生临床中心范小勇研究员为本文通讯作者，上海市公共卫生临床中心胡志东副研究员为共同通讯作者。本项目得到了国家重点研发项目、国家自然科学基金、上海市优秀学术带头人和上海卫生健康优秀学科带头人等项目的支持。
